狗狗过敏吃什么?
食物过敏是指动物机体非特异性的对某种食物抗原所产生的超常免疫反应[1],这种过敏反应可导致全身不同系统的症状和体征的发生,如皮肤瘙痒、荨麻疹、哮喘等;也可累及胃肠道黏膜导致腹痛腹泻或出血性炎症改变;严重的甚至可能引起动物死亡[2-3] 临床上常见的一些由食入性变应原引起的过敏性胃肠病以食物过敏性肠炎为主[4],主要表现为粪便的性状改变(大便稀软或水样便)、粘液或血便以及腹痛腹泻等胃肠道不适症状,有时还可能伴有呕吐。
本研究旨在通过实验室检测方法探究犬食物过敏原的种类及其与临床症状之间的关系,从而为临床疑似食物过敏患犬的诊断提供依据和帮助,同时为犬饲料的生产厂家提供一定的参考信息,以便于他们能够生产出更加健康的商品粮,以满足宠物健康成长的需要。
1.材料与方法 (1)动物 本研究选择5只年龄相同、体重相近的健康成年雄性比熊作为受试对象, 健康状态良好且无疾病史。 (2)试剂 10%三氯乙酸溶液: 取10g三氯乙酸溶解于90ml水中配成10%三氯乙酸溶液备用,现用现配。
10%甲醛溶液: 取10g甲醛溶解于90ml水中配成1%甲醛溶液备用,现用现配。
牛血清白蛋白(BSA)标准品: 购自美国Sigma公司,浓度为1mg/mL。
弗氏完全佐剂: 购自德国Merck公司。
弗氏不完全佐剂: 购自德国Merck公 司。 卵清蛋白(ovalbumin, OVA): 购于美国Sigma公司,浓度为94 mg/mL。
氢氧化铝凝胶(aluminum hydroxide gel:AAH): 购于北京双鹤高博制药有限公司,规格每支2 g,使用时将AAH研磨成粉状,过筛孔径为180~200μm 的滤网后备用。 小鼠抗大鼠IgE单克隆抗体: 购于上海西邦生物技术有限公司,批号S66714;小鼠抗大鼠IgG多克隆抗体:同上,批号S66716;山羊抗小鼠IgG二抗荧光素标记:购于北京中杉金桥生物技术有限公司产品,批号ZM-2127;辣根酶标记山羊抗小鼠IgG抗体:购于北京中杉金桥生物技术有限公司产品。
ELISA试剂盒: 购于深圳晶美生物科技有限公司,用于测定血浆中的总IgE含量,其灵敏度范围为0~1 960 IU/mL。
(3)仪器与设备 全自动生化分析仪:日本奥林巴斯公司AU640型全自动生化分析仪;酶标仪: 购自美国BioRad公司iMarkTM 酶标仪系列;显微镜: Olympus IX51倒置金相显微镜,日本奥林巴斯公司;台式高速冷冻离心机:购自德国Eppendorf公司;超净工作台:苏州净化设备厂生产;分光光度计:型号UV2550,日本岛津生产;低温冰箱:天津奥特赛恩斯公司生产;恒温培养箱:重庆四联仪器制造有限公司生产;(4)样本收集 根据各试验组不同时间采集的食物样本量,设计如下试验方案: (5)实验步骤 第1步:制备OVA乳剂,每只犬每天皮下注射一次,每次注射前充分摇匀(图1a)。 第2步:连续给药两周。 第3步:分别于第0天、第7天和第14天,用1:10稀释的OVA液0.05 mL进行耳缘静脉穿刺,每针后均给予弗氏完全佐剂0.05 mL进行加强免疫。 第4步:在免疫前后给试犬饲喂常规基础饮食,记录其一般情况和有无不良反应。 在加强免疫的当日收集试验犬的外周血液,离心分离血清,保存于-20℃条件下待测。 第5步:观察试验期间的症状并记录,包括粪便性状的改变、食欲情况以及精神状况等。在第15天的试验末次饲喂时记录犬的进食量,并于禁食2 h后处死所有犬并进行剖检。
1.2 统计学处理 对所得数据进行正态分布检验,结果表明所获数据不符合正态分布,故采用非参数统计检验进行分析,具体计算过程如下所示:
其中, n1 and n2 are the sample sizes in two groups respectively P is the significance level α=0.05 The value of r is between −1 to 1, if it is close or equals to zero means there is no correlation between test values. For example, the Pearson coefficient is used for linear relationship analysis while Spearman's rho is suitable for nonlinear data sets such as ordinal data. It can be concluded from the above formula that if the sample size is bigger, then power increases. In addition, when the degree of freedom is high enough, the difference